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细胞培养过程中发生支原体污染、噬菌体污染、真菌污染怎么解决?

时间:2022-09-23   访问量:1001

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细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中核心又基础的技术。


细胞的生长需要一定的营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。营养物和水一起,又叫细胞培养液,培养液中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。但同时这些物质也是微生物生长繁殖所需要的营养,难免会出现细胞污染的问题。
细胞培养污染有哪些种类
一、细菌的污染
特征:大小在0.5~5 μm,比动物细胞小很多。多呈球状或杆状,形态规则,分布均匀;增殖速度快,一般污染后48~72小时爆发式增殖;营养消耗快,培养基很快变黄,变浑浊;镜下观察有明显的定向运动。
二、真菌污染
特征:呈链球状或丝状。常形成肉眼可见的菌落,培养基颜色无变化或变紫,仅对局部细胞影响较大,其他地方生长正常。会形成孢子,容易污染其他细胞。
三、支原体污染
特征:最小的微生物,无法通过光学显微镜看见,但可通过电镜观察到。感染支原体的细胞,在某一时间点碎片突然增多,随着传代,细胞状态显著变差。支原体污染可通过气溶胶传播,影响同一细胞房其他细胞。
四、黑胶虫污染
特征:无明确定义,镜下无法直接观察到。主要表现为细胞状态差,黑点和碎片多,布朗运动。通过检测发现主要为支原体污染,部分为未知的增殖不明显的微生物污染。
五、霉菌污染
特征:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37℃孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差。
六、病毒污染
特征:细胞胞状态变差,出现空泡化的现象。
七、噬菌体污染
噬菌体具有一般病毒所有的特征:为非细胞生物,其结构主要由蛋白质和核酸(DNA或RNA)组成;它们只能在活细胞内营专性寄生,靠其宿主代谢补充,协助来复制核酸合成蛋白质等组分,然后再进行装配增殖。在离体条件下,能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性;非常专一的寄生性,在自然环境条件下,它们只能侵染细菌和一些原生生物,而不能侵染高等生物和植物;对一般抗生素不敏感,但对干扰素敏感;个体小,可通过除菌滤器。
噬菌体没有个体的生长过程,只有基本成分的合成和装配,所以一般将噬菌体的繁殖称作复制。

细胞一旦发现有污染出现,应及时对所用试剂和耗材进行清理。耗材可更换新的或者重新高压灭菌,试剂可重新过滤除菌或者更换新批次,操作台和细胞房需用消毒液进行全面清洁消杀后方可复苏新的细胞,以免反复出现污染。
细胞培养房全面消杀的工作,如果没有借助自动化消毒机恐怕会很费力气,浪费人力不说,还有可能会出现消毒不到位的情况,无法彻底清除污染,存在反复污染风险。那么全自动消毒机用哪种方式比较好呢。
从事细胞培养工作多年的润联了解到,目前自动化过氧化氢干雾消毒机形式多样,品类繁多,但水平参差不齐。做得比较好的技术成熟的有比林科汉,是细胞房消毒的领路者,干雾技术十五年积累,中外结合,智能化全自动消杀,数字化管理,可视化消毒过程,看得见的效果。

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